中药荜茇活性成分荜茇酰胺抗胃癌的作用机制研究

作者: 贾贵清 [1] 彭婷 [2] 白兰 [2]

关键词: 胃癌 荜茇酰胺 细胞活性 凋亡率 增殖

摘要:目的 观察不同浓度中药荜茇活性成分荜茇酰胺作用不同时间对胃癌MKN45细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将培养至对数期的胃癌细胞株MKN45用不同浓度的荜茇酰胺处理后,选择10μmol/L荜茇酰胺用于后续实验,设定空白对照组、3 mmol/L抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、10μmol/L荜茇酰胺组和3 mmol/L NAC预处理+10μmol/L荜茇酰胺组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、活性氧簇(ROS)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测通路中相关蛋白p21、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况.结果 ① 细胞活性:荜茇酰胺可抑制MKN45细胞活性,其作用呈浓度和时间的正相关性(均r>0.8,P<0.05);②G1期阻滞:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞G1期阻滞,其作用呈浓度正相关性(均r>0.8,P<0.05),0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下G1期细胞为(35.33±3.56)%、(41.42±4.04)%、(48.78±5.24)%、(55.12±5.78)%;③ 细胞凋亡:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下细胞凋亡率分别为(9.21±2.13)%、(13.82±3.45)%、(19.66±4.73)%、(25.21±5.05)%;④caspase细胞凋亡途径:0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺可下调抗凋亡蛋白XIAP表达,上调剪切caspase-9及剪切PARP表达(XIAP为0.432±0.101、0.120±0.022、0.023±0.005、0.005±0.001,剪切caspase-9为0.003±0.001、0.007±0.001、0.225±0.049、0.649±0.132,剪切PARP为0.005±0.001、0.014±0.003、0.428±0.152、0.895±0.111);即荜茇酰胺可激活caspase依赖性凋亡途径,其作用呈浓度依赖性;⑤ROS-p53细胞凋亡途径:荜茇酰胺能上调ROS、p53、p21、p53凋亡调控因子(PUMA)表达,其作用呈浓度依赖性,经NAC处理后,ROS水平降低为(850.48±124.53)U/L,MKN45细胞活性上升为(73.45±6.12)%,p53降低为0.732±0.152、剪切PARP蛋白表达降低为0.487±0.108.结论 荜茇酰胺可抑制胃癌细胞MKN45增殖,降低其活性,阻滞细胞周期G1期,诱导凋亡,可能的作用机制为提高细胞ROS水平,激活p53与caspase凋亡途径有关.


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